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生物切片制作廠家與您分享切片制作方法

來源:http://www.whjwxh.com/news/99.html    發布時間:2018-05-02    點擊:307

一、制備顯微标本的切片法

一石蠟包埋切片制作法

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這是最常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質,将整塊組織加以包埋,最後凝固成均勻一緻的固态結構。用切片機制取極薄的切片。為了讓石蠟能浸入組織内部,需将組織經過脫水等處理。過程大緻如下:
⑴固定:生物标本脫離機體或培養環境,細胞會發生自溶,腐敗分解。因此,需用固定劑處理,使蛋白質凝固停止瀕死或死後變化。凡供******保存的标本都需經固定處理。
常用的固定劑是甲醛、乙醇等,能使蛋白質凝固。還有由幾種試劑配成的固定液,例如Carnoy固定液,由、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更強,不含水分,可避免水溶性物質如糖原等在固定過程中損失。
⑵脫水:是将組織細胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),濃度遞升到 100%。此過程還使組織塊進一步硬化。
⑶透明:是用既能溶于純酒精又能融解石蠟的有機溶劑,将組織中的酒精取代,以便石蠟浸入。通常用二甲苯(xylene)為透明劑。
⑷浸蠟:在溫箱内進行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中,讓石蠟浸透組織,作為支持介質。
⑸包埋:将已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中,迅速冷凝,組織決便被蠟包埋。
⑹切片:用切片機。常用的切片機有輪轉式、平推式的。用輪轉式的易于切出連續切片。切片厚度随制片目的而調整。教學标本厚度多是5~6μm。
⑺貼片烤幹:在溫水上展平後,移在玻片上,烤幹,即可供染色處理。染色後用樹膠、蓋坡片封固,可******保存。
二冷凍切片法
冷凍切片法是借組織在低溫下,凍結變硬而達到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機,或在普通切片上配制冷設施。恒冷切片機是高級冷凍切片設備。它有一個恒冷箱,标本緻冷台和切片機都裝在箱内。恒冷箱的作用類似冰箱,可在一定範圍内調整溫度,其結構有利于保持箱内恒定低溫,減少箱門打開時環境溫度的幹擾。切片機的輪轉把手裝在箱外,便于操縱切片。
冷凍切片法的優點是:在處理得當時,它可以******限度地保持組織的新鮮狀态。并且,由于不需經脫水、透明、浸蠟等過程中有機溶劑的處理,及濕箱浸蠟熱的影響,甚至可不經固定。所以能很好地保存組織細胞的各種成分和酶的活性,因此在酶的組織化學研究中常用此切片法。
二、顯示标本結構成分的染色法
一蘇木素伊紅染色法(法)
為最常用的染色法。該法應用于各種組織的染色,是組織學技術的基本方法,對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用,隻是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的法。
1、脫蠟:的組織内部充滿石蠟,不能使水溶性染液着色,因此在染色前必須首先用二甲苯将石蠟脫掉,共兩次。
2、下行入水:将已脫蠟的标本浸入及各級酒精,使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。
4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘
5、自來水洗去多餘染料。
6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色,邊分色邊鏡檢,至核呈紅紫色,細胞質無
色為合适。
7、分色後用自來水或加數滴氨水堿化,直至細胞核變成藍色。這一步驟也可稱為“藍化”。
8、入蒸餾水洗去堿性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。
10、入伊紅染液染色30秒至數分鐘。
11、以95%酒精對伊紅分色,至胞漿,結締組織等呈桃紅色。
12、上行脫水:染色後的切片,因組織内含水而不透明,不能清晰地觀察其微細結構。因此,須将組織内的水分經各級酒精→逐步置換,最後進入不含水份的透明劑内。
13、透明:入二甲苯透明劑,二次(各數分鐘)。

14、取出切片:将組織周圍多餘的二甲苯擦去,滴樹膠後加蓋玻片封固。

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結果:細胞核藍紫色,胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色,嗜酸性顆粒為鮮紅色,呈明亮桃紅色。




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